人猪流感(H1N1)病例标本采集和实验室检测指南(暂行)
来源:中华人民共和国卫生部

    猪流行性感冒(H1N1病毒)病毒的检测
    所有猪流行性感冒(H1N1病毒)疑似病例应该采集上呼吸道标本来检测猪流行性感冒(H1N1病毒)的病毒。

    推荐采集的呼吸道标本
    疾病发病后应尽快采集如下标本:鼻咽拭子/吸取物或者鼻腔冲洗液/吸取物。如果不能收集这些标本,可合并鼻拭子与口咽拭子。气管插管的病人也应收集气管吸取物。标本应置于无菌病毒运输液(VTM),并立即用冰块或冰排保存或置于4℃(冰箱),并马上运送至实验室。临床样品收集人员及实验室人员的感染控制指导请见相关文件。

    拭子
    理想的情况下,标本应使用头部为合成纤维的拭子(例如,聚酯纤维),用铝或塑料做杆。不推荐棉拭子和木杆。不能用海藻酸钙做的拭子收集标本。标本采集管应包含3毫升病毒运输液(例如,含有蛋白质稳定剂,阻止细菌和真菌生长的抗生素,缓冲液) 。

    临床标本储存
    所有呼吸道标本应保存在4℃,并尽快放置在-70℃。如果没有-70℃度冰箱,标本应保存在4℃,但不应超过4天。

    临床标本运输
    临床标本应按照A类包装要求运送,并用干冰运输。 所有标本应标示清楚。疑似病例标本运送应包含的信息请参照禽流感标本运输。

    检测程序
    呼吸道标本应首先应用real time RT-PCR方法检测A型流感病毒的M基因、Swine(H1N1)的HA基因和NP基因,以及质控对照RNP基因。同时,接种MDCK细胞或SPF鸡胚进行病毒分离,并测定病毒的全基因组序列。

    推荐的检测方法
    用Real-time RT-PCR方法检测猪流行性感冒(H1N1病毒)病毒。

    其他检测方法
    快速流感抗原检测 一些商用快速检测可以区分A和B型流感病毒。快速检测实验A型流感阳性的病例符合可能病例的标准(见上文)。这些实验对检测人感染猪流行性感冒(H1N1病毒)病毒临床标本的敏感性和特异性未知,而且检测季节性流感病毒的灵敏度不佳。因此,快速检测阴性结果可能是假阴性,不能作为猪流感感染的最后诊断。
    免疫荧光法(或装配的IFA) 免疫荧光试验可以区分A和B型流感病毒。检测A型流感阳性的病例符合可能病例的标准(见上文)。免疫荧光试验的结果取决于临床标本的质量,操作技能,对检测人感染猪流行性感冒(H1N1病毒)病毒临床标本的敏感性和特异性未知。因此,免疫荧光试验阴性结果可能是假阴性,不能作为猪流感感染的最后诊断。
    病毒培养 可用MDCK细胞和SPF鸡胚分离猪流感(H1N1病毒)病毒可以诊断感染,但无法为临床诊断及时提供结果。病毒分离阴性并不能排除感染猪流感(H1N1病毒)病毒。
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