前言：
    感染性疾病的最大特点是存在病原体。病原的检测在感染病学的诊断中占有极其重要的地位。聚合酶链反应(Polymerase Chain reaction PCR)是体外扩增特异性DNA或RNA片段的一种技术，通过PCR的扩增，样品中的靶DNA或RNA可以成千上万甚至百万倍的增加。上个世纪的90年代以前，乙型及丙型肝炎的实验室诊断仅依靠ELISA法检测抗原抗体。ELISA法的检测仅在ng水平，而PCR可以检测至fg水平。由于PCR技术原理简单，操作简便，曾一度在全国各地遍地开花，但由于没有统一标准，质量得不到控制，污染问题没有解决，曾被限制应用。近几年随着定量PCR的开展，上述问题已基本解决。卫生部临检中心已经举办了多次推广学习班，随着质控标准的实施，PCR技术将在临床诊断中广泛应用。

PCR技术的理论依据：
    PCR技术的原理并不高深，但思路却很精巧而独特。PCR技术对分子生物学各个领域的发展起到了很大的推动作用，是80年代、90年代最重要的分子生物学技术之一。它的设计者由此获得了1993年生物医学的诺贝尔奖。 二十世纪人类最伟大的两大发现是DNA双螺旋结构及计算机技术。PCR技术就是根据DNA复制的原理和DNA聚合酶作用的特点而设计的。DNA在高温的条件下变性，由双螺旋结构变为单链(变性denaturation);在一定温度下，引物(Primer)以碱基配对的方式与单链结合(退火，annealing);在合适的温度、Mg2+浓度及缓冲液中，在DNA聚合酶的作用下，使反应液体系中的dNTP按照5’-3’方向聚合(延伸，elongation),形成的新的DNA单链与模板单链的核苷酸序列互补(图1)，经过这样一个循环，双链DNA得到加倍，反复进行，可以2ⁿ倍数增加。

实时、定量荧光PCR技术原理：
    为了更精确的检测样品中DNA或RNA的含量，我科目前采用瑞氏罗氏公司的实时、定量、全自动PCR检测仪。图2、图3、图4。
    荧光特点：
    SyBR Green I 监控PCR
    杂交探针监控PCR
    水解探针监控PCR

方法：

Sample

DNA or RNA

Template Primer1 Primer2 Lox Reaction buffer Mg2+ dNTPMix Taq DNA Polymerase

37℃5’ 94℃1’； 95℃5’’ 60℃30’’ 40Cyele

results

临床意义：
1．用于乙型肝炎及丙型肝炎的常规诊断：
   乙型肝炎：大三阳    80%以上    小三阳    20-30%左右，前C区变异
   丙型肝炎：抗HCV-IgG阳性→筛选
   HCV-RNA升高→确诊
2．用于乙型肝炎HBsAg阴性的患者的诊断，乙肝疫苗应答。
3．用于肝炎病毒基因组的扩增，分子克隆。
4．阐述部分发病机制，指导治疗。
   发病机理：机体→病毒
   指导临床抗病毒药物的选用
   HBV-DNA浓度变化→病情变化
5．抗病毒疗效的观察和评价。